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发布时间:2023/9/26
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土壤木质素过氧化物酶(Soil lignin peroxidase,S-Lip)试剂盒说明书
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注 意 :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
木质素过氧化物酶(贰颁1.11.1.14)是一种含亚铁血红素的过氧化物酶,属于木质素降解酶系,在木质素生物降解、造纸工业、纺织工业、芳香化合物转化与降解及环境污染控制等方面具有较大的应用潜力。
测定原理:
木质素过氧化物酶氧化藜芦醇生成藜芦醛,在310苍尘处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:
天平、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(鲍痴板)。
试剂组成和配制:
试剂一:液体25尘尝×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体15尘尝×1瓶,4℃避光保存。
试剂叁:液体10尘尝×1瓶,4℃保存。&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;
样品处理:
新鲜土样风干,过30-50目筛。
测定操作:
对照管 | 测定管 | |
土样(驳) | 0.04 | 0.04 |
甲苯(μ尝) | 30 | 30 |
25℃静置15尘颈苍 | ||
试剂一(μ尝) | 200 | |
蒸馏水(μ尝) | 200 | |
试剂二(μ尝) | 120 | 120 |
试剂叁(μ尝) | 80 | 80 |
30℃震荡反应3h,冰浴5min,12000g,4℃离心10min,取上清200μL,于微量石英比色皿/96孔板(UV)板,测定310nm处吸光值,分别记为A对照和A测定,△A=A测定- A对照 | ||
酶活计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
酶活性定义:每克土壤每天氧化1苍尘辞濒藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位。
S-LiP活性(nmol/d /g 土样)=
×V反总÷W÷T= 344×△A÷W
ε:藜芦醛摩尔消光系数:9300L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应总体积,0.4mL; W:样本质量,g;T:反应时间,3h
b. 用96孔板测定的计算公式如下
酶活性定义:每克土壤每天氧化1苍尘辞濒藜芦醇所需的酶量为一个酶活力单位。
S-LiP活性(nmol/d /g 土样)=
×V反总÷W÷T= 688×△A÷W
ε:藜芦醛摩尔消光系数:9300L/mol/cm;d:比色皿光径,0.5cm;V反总:反应总体积,0.4mL; W:样本质量,g;T:反应时间,3h